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Analogamente ad altri virus a RNA a filamento positivo, i tombusvirus sono replicati dal complesso di replicasi virale legato alla membrana (VRC).Il VRC è costituito dalla RNA polimerasi (RdRp) codificata dal virus p92, dal chaperone dell'RNA virale p33 e da diverse proteine ​​ospiti cooptate.Per diventare un RdRp funzionale dopo la sua traduzione, la proteina di replicazione p92 dovrebbe essere incorporata nel VRC, seguita dalla sua attivazione.Abbiamo precedentemente dimostrato in un saggio basato su estratto di lievito privo di cellule che l'attivazione del Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp richiede uno o più fattori ospiti solubili.In questo articolo, identifichiamo la proteina da shock termico cellulare 70 (Hsp70) come il fattore ospite cooptato richiesto per l'attivazione di un TBSV RdRp ricombinante troncato N-terminale.Inoltre, il blocco basato su piccole molecole della funzione Hsp70 inibisce la sintesi dell'RNA da parte del tombusvirus RdRp in vitro.Inoltre, mostriamo che i fosfolipidi neutri, vale a dire la fosfatidiletanolamina (PE) e la fosfatidilcolina (PC), migliorano l'attivazione di RdRp in vitro.Al contrario, il fosfatidilglicerolo (PG) mostra un effetto inibitorio forte e dominante sull'attivazione in vitro di RdRp.Dimostriamo anche che PE e PC stimolano l'interazione RdRp-viral plus-strand RNA [(+)RNA], mentre PG inibisce il legame dell'RNA virale alla RdRp.Sulla base dei ruoli stimolatori rispetto a quelli inibitori di vari fosfolipidi nell'attivazione di RdRp del tombusvirus, proponiamo che la composizione lipidica delle membrane subcellulari mirate possa essere utilizzata dai tombusvirus per regolare il nuovo assemblaggio di VRC durante il corso dell'infezione. La RNA polimerasi RNA-dipendente codificata dal virus (RdRp), che è responsabile della sintesi della progenie dell'RNA virale nelle cellule infette di diversi virus a RNA a filamento positivo, è inizialmente inattivo.È probabile che questa strategia eviti la sintesi dell'RNA virale nel citosol che porterebbe rapidamente all'induzione di risposte antivirali cellulari attivate dall'RNA.Durante l'assemblaggio del complesso replicasi legato alla membrana, la RdRp virale viene attivata attraverso un processo non completamente compreso che rende la RdRp capace di sintesi di RNA.Utilizzando TBSV RdRp, dimostriamo che il chaperone cellulare Hsp70 cooptato e i fosfolipidi neutri facilitano l'attivazione di RdRp in vitro.Al contrario, il fosfatidilglicerolo (PG) ha un effetto inibitorio dominante sull'attivazione RdRp in vitro e sull'interazione RdRp-RNA virale, suggerendo che il microdominio membranoso che circonda la RdRp influisce notevolmente sulla sua capacità di sintesi dell'RNA.Pertanto, l'attivazione della RdRp virale dipende probabilmente da più componenti dell'ospite nelle cellule infette.