Prodotti

Monogalattopiranosidi della fluoresceina e fluoresceina metil estere: sintesi, idrolisi enzimatica mediante β-galattosidasi biotnilata e determinazione del coefficiente di diffusione traslazionale

I monoglicosidi di fluoresceina (d-galattopiranoside (FMG) e d-glucopiranoside) e il loro estere metilico (MFMG) sono stati preparati da acetobromoglucosio/galattosio e estere metilico di fluoresceina con buone rese.Sono stati eseguiti esperimenti di idrolisi enzimatica (utilizzando β-galattosidasi biotinilata) dei derivati ​​​​del galatto e sono stati calcolati i parametri cinetici.Durante l'idrolisi è stato osservato un aumento di 15-20 volte dell'intensità della fluorescenza.È stato notato un aumento lineare della fluorescenza in breve tempo e bassa concentrazione di substrato, rendendo questi composti sonde utili e sensibili per le galattosidasi.L'entità del valore della costante di Michaelis-Menten (Km) per MFMG è superiore a quella di FMG suggerendo un possibile cambiamento conformazionale del substrato fluorogenico.Il valore Km per β-Gal biotinilato con FMG è inferiore a quello per l'enzima nativo.Questa osservazione indica una maggiore affinità del substrato dell'enzima biotinilato rispetto all'enzima nativo.I coefficienti di diffusione traslazionale sono stati misurati, sia per i substrati fluorogenici che per entrambi i prodotti, impiegando la spettroscopia di correlazione della fluorescenza.I coefficienti di diffusione traslazionale per i substrati fluorogenici e i prodotti di idrolisi enzimatica sono stati misurati per essere simili, nell'intervallo di 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Pertanto, un miglioramento o un ritardo della cinetica enzimatica dovuto alla differenza nella mobilità traslazionale del substrato e del prodotto non è così evidente.