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Effetti dei detergenti sull'attività dell'atpasi della glicoproteina P: differenze nelle perturbazioni delle attività basali e dipendenti dal verapamil.

La glicoproteina P (P-gp), una glicoproteina della membrana plasmatica associata al fenotipo di multiresistenza ai farmaci, è responsabile dell'efflusso ATP-dipendente di vari farmaci anfifilici.Utilizzando vescicole di membrana preparate dalla linea cellulare multiresistente DC-3F/ADX, abbiamo studiato la perturbazione delle attività basali (cioè in assenza di farmaco) e verapamil-dipendenti della P-gp ATPasi indotte da vari detergenti, a non solubilizzazione, così come a concentrazioni solubilizzanti.La progressiva solubilizzazione della membrana con l'aumentare della concentrazione del detergente è stata monitorata mediante esperimenti di diffusione della luce e centrifugazione.Per le concentrazioni di detergenti non solubilizzanti, tutti i detergenti testati tranne DOC hanno indotto una parziale inibizione dell'attività P-gp ATPasi, che non era correlata con la quantità dei vari detergenti testati incorporati nelle membrane.L'analisi dell'attivazione della P-gp indotta da verapamil rivela che l'attività della P-gp ATPasi è diversamente modulata dai vari detergenti a concentrazioni non solubilizzanti.Pertanto, è più probabile che si verifichino interazioni specifiche tra P-gp e detergenti piuttosto che una perturbazione globale della membrana.Dopo la solubilizzazione da parte dei vari detergenti testati, l'attività basale della P-gp ATPasi era praticamente completamente inibita, tranne che in presenza di CHAPS che era in grado di preservare questa attività ad un livello paragonabile a quello misurato nelle membrane native.Tuttavia, l'attivazione dell'ATPasi P-gp indotta da verapamil è stata persa durante la solubilizzazione di P-gp da parte di CHAPS, ma è stata recuperata dopo la diluizione di CHAPS al di sotto della sua concentrazione micellare critica.Queste osservazioni indicano interazioni specifiche tra le molecole P-gp e CHAPS all'interno delle micelle miste.Nel complesso, i nostri dati che evidenziano interazioni specifiche P-gp/detergenti sono coerenti con la posizione dei siti di trasporto del farmaco sui domini transmembrana P-gp.