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X-gal (abbreviato anche BCIG per 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galattopiranoside) è un composto organico costituito da galattosio legato a un indolo sostituito.Il composto è stato sintetizzato da Jerome Horwitz e collaboratori nel 1964. Il nome chimico formale è spesso abbreviato in frasi meno accurate ma anche meno ingombranti come bromochloroindoxyl galactoside.La X da indoxyl può essere la fonte della X nella contrazione X-gal.X-gal è spesso utilizzato in biologia molecolare per testare la presenza di un enzima, la β-galattosidasi, al posto del suo bersaglio abituale, un β-galattoside.Viene anche utilizzato per rilevare l'attività di questo enzima in istochimica e batteriologia.X-gal è uno dei tanti glicosidi ed esteri indossilici che producono composti blu insolubili simili al colorante indaco come risultato dell'idrolisi catalizzata da enzimi.

X-gal è un analogo del lattosio e quindi può essere idrolizzato dall'enzima β-galattosidasi che scinde il legame β-glicosidico nel D-lattosio.X-gal, quando scisso dalla β-galattosidasi, produce galattosio e 5-bromo-4-cloro-3-idrossiindolo-1. Quest'ultimo poi dimerizza spontaneamente e viene ossidato in 5,5'-dibromo-4,4'-dicloro -indigo - 2, un prodotto intensamente blu che è insolubile.X-gal stesso è incolore, quindi la presenza di prodotto di colore blu può quindi essere utilizzata come test per la presenza di β-galattosidasi attiva.Ciò consente anche di utilizzare la β-galattosidasi batterica (la cosiddetta lacZ) come reporter in varie applicazioni.

Nell'analisi a due ibridi, la β-galattosidasi può essere utilizzata come reporter per identificare le proteine ​​che interagiscono tra loro.In questo metodo, le librerie del genoma possono essere sottoposte a screening per l'interazione proteica utilizzando lievito o sistema batterico.Dove c'è un'interazione di successo tra le proteine ​​sottoposte a screening, si tradurrà nel legame di un dominio di attivazione a un promotore.Se il promotore è legato a un gene lacZ, la produzione di β-galattosidasi, che si traduce nella formazione di colonie pigmentate blu in presenza di X-gal, indicherà quindi un'interazione riuscita tra le proteine.Questa tecnica può essere limitata allo screening di librerie di dimensioni inferiori a circa 106. La scissione riuscita di X-gal crea anche un odore notevolmente sgradevole dovuto alla volatilizzazione dell'indolo.

Poiché lo stesso X-gal è incolore, la presenza di un prodotto di colore blu può essere utilizzata come test per la presenza di una β-galattosidasi attiva.

Questa facile identificazione di un enzima attivo consente di utilizzare il gene per la βgalattosidasi (il gene lacZ) come gene reporter in varie applicazioni.