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Di recente sono state sollevate domande frequenti: 1. Perché è possibile utilizzare il test ONPG per distinguere la fermentazione ritardata del lattosio?2. Perché la norma nazionale afferma che è necessario utilizzare il 3% di ferro trisaccaride cloruro di sodio (o ferro trisaccaride) per il test ONPG?3. Per Vibrio parahaemolyticus, quando si esegue il test OPNG, perché il toluene dovrebbe essere aggiunto goccia a goccia secondo lo standard?Qual è la funzione?

La nostra azienda ha esaminato molte informazioni, le ha riassunte e le ha condivise con voi di seguito:

Principio: il nome cinese di ONPG è o-nitrobenzene-β-D-galattopiranoside.L'ONPG può essere idrolizzato in galattosio e o-nitrofenolo giallo (ONP) dalla β-galattosidasi, quindi l'attività della β-galattosidasi può essere rilevata dal cambiamento di colore del terreno di coltura.

Il lattosio è uno zucchero che la maggior parte dei microrganismi deve rilevare.Il suo metabolismo richiede due enzimi, uno è la permeasi cellulare, il lattosio entra nelle cellule sotto l'azione della permeasi;l'altro è la β-galattosidasi, che idrolizza il lattosio in galattosio.Lattosio e glucosio.La β-galattosidasi può anche agire direttamente sull'ONPG per idrolizzarlo in galattosio e o-nitrofenolo giallo (ONP).Si può fare in 24h, anche con fermentatori ritardati del lattosio.Pertanto, spiega i risultati dell'osservazione del prelievo della coltura 1 dallo slant dell'agar e dell'inoculazione in un cerchio completo a 36°C per 1-3 ore e 24 ore.Se viene prodotta la β-galattosidasi, diventerà gialla in 1-3 ore, se non esiste tale enzima, non cambierà colore in 24 ore.

Secondo i due enzimi di cui sopra, i microrganismi possono essere suddivisi nelle seguenti categorie:

1 batteri lattosio fermentanti (18-24 ore) con permeasi e β-galattosidasi P + G +;

2 Fermentatori ritardati del lattosio (che impiegano più di 24 ore) privi di permeasi ma con galattosidasi: P- G+.

3 Fermentatori non lattosio privi sia di permeasi che di galattosidasi: P- G-.

Il test ONPG può essere utilizzato per distinguere i batteri fermentanti il ​​lattosio (P-G+) dai batteri lattosio non fermentanti (PG-), come ad esempio:

1 Differenziare i fermentatori tardivi del lattosio (P- G+) da quelli che non fermentano il lattosio (P- G-).

a) Citrobacter (+) e Salmonella arizonae (+) da Salmonella (-).

(b) Escherichia coli (+) da Shigella sonnei (-).

Perché il test ONPG è stato eseguito utilizzando una coltura notturna su trisaccaride ferrico cloruro di sodio al 3% (trisaccaride di ferro)?La nostra azienda ha consultato molte informazioni, ma non esiste una dichiarazione chiara.Solo sul sito web della FDA, è scritto che "Inoculare le colture da testare su slant di agar ferro a triplo zucchero e incubare per 18 ore a 37°C (o altra temperatura appropriata, se necessario). Slant di agar nutriente (o altro) contenente 1,0 % di lattosio può essere utilizzato anche."significa: i batteri del test sono stati inoculati sul terreno di ferro trisaccaride e coltivati ​​a 37°C per 18 ore.Sono accettabili anche slant di agar nutriente (o altro) contenente l'1% di lattosio.Pertanto, si deduce che il mezzo di ferro trisaccaride contiene lattosio.Dopo la crescita durante la notte, i batteri hanno prodotto una buona β-galattosidasi attiva.Usando tali batteri, l'ONPG può essere decomposto più velocemente dalla β-galattosidasi.Il fenomeno sperimentale è più rapido e meglio manifestato.Inoltre, l'aggiunta goccia a goccia di toluene e un bagno d'acqua per 5 minuti servono a rilasciare completamente la β-galattosidasi.