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Uno dei fattori che impediscono l'applicazione clinica della medicina rigenerativa alle malattie degenerative della cartilagine è una fonte adeguata di cellule.I condrociti, l'unico tipo cellulare di cartilagine, cresciuti in vitro in condizioni di coltura per espandere il numero di cellule perdono il loro fenotipo insieme alla capacità di generare tessuto cartilagineo ialino.In questo studio determiniamo che un sistema di coltura tridimensionale (3D) privo di siero e fattore di crescita ripristina la capacità dei condrociti passati di formare tessuto cartilagineo in vitro, un processo che coinvolge sox9. I condrociti articolari bovini sono stati passati due volte per consentire l'espansione del numero di cellule (P2) e coltivato ad alta densità su membrane 3D rivestite di collagene di tipo II in mezzi ad alto contenuto di glucosio integrati con insulina e desametasone (SF3D).Le cellule sono state caratterizzate dopo l'espansione del monostrato e dopo la coltura 3D mediante citometria a flusso, espressione genica e istologia.Sono stati caratterizzati i primi cambiamenti nelle vie di trasduzione del segnale durante la reddifferenziazione dello ione. Le cellule P2 hanno mostrato un profilo antigenico simile al progenitore del 99% CD44(+) e del 40% CD105(+) e un profilo di espressione genica indicativo di cellule interzone.P2 in SF3D esprimeva geni condrogenici e matrice extracellulare accumulata.La downregolazione del recettore dell'insulina (IR) con HNMPA-(AM3) o la via della chinasi PI-3/AKT (attivata dal trattamento con insulina) con Wortmannin ha inibito la sintesi del collagene.HNMPA-(AM3) ha ridotto l'espressione dei geni Col2, Col11 e IR, nonché Sox6 e -9.Le analisi di co-immunoprecipitazione e immunoprecipitazione della cromatina delle cellule trattate con HNMPA- (AM3) hanno mostrato il legame dei coattivatori Sox6 e Med12 con Sox9 ma hanno ridotto il legame Sox9-Col2a1. Descriviamo un nuovo metodo di coltura che consente di aumentare il numero di condrociti e promuove formazione di tessuto cartilagineo simile alla ialina in parte mediante legame Sox9-Col2a1 mediato da insulina.L'idoneità del tessuto generato tramite questo approccio per l'uso nella riparazione articolare deve essere esaminata in vivo.