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1. I metodi di profilazione dei metaboliti sono strumenti importanti per la misurazione dei pool di metaboliti nei sistemi biologici.Mentre la maggior parte dei metodi di profilazione dei metaboliti riportano intensità relative o dipendono da alcuni standard interni che rappresentano tutti i metaboliti, il requisito ultimo per una descrizione quantitativa del pool di metaboliti nelle cellule e nei fluidi biologici è la determinazione della concentrazione assoluta.Riportiamo qui un metodo di profilazione del metabolita mirato ad alto rendimento e sensibile gascromatografia/spettrometria di massa tandem (GC/MS/MS) che consente la quantificazione assoluta di tutti i metaboliti rilevati.Il metodo si basa sulla derivatizzazione e quantificazione del metilcloroformiato aggiungendo ai campioni standard di metaboliti derivatizzati separatamente con reagenti di derivatizzazione deuterati.La tradizionale ionizzazione per impatto elettronico viene sostituita dalla ionizzazione chimica positiva poiché quest'ultima preserva in misura molto maggiore lo ione molecolare e altri frammenti ad alto peso molecolare.Ciò ha reso più semplice la selezione di transizioni MS/MS univoche tra i numerosi metaboliti coeluenti.Attualmente, il nuovo metodo GC/MS/MS comprende 67 metaboliti primari comuni, la maggior parte dei quali appartiene ai gruppi di acidi organici amminici e non amminici.Mostriamo l'applicabilità del metodo su campioni di urina e siero.Il metodo rappresenta un significativo miglioramento della presente metodologia per la profilazione quantitativa dei metaboliti GC/MS di aminoacidi e acidi organici non amminici.

2.24S-idrossicolesterolo (24OHC) e 27-idrossicolesterolo (27OHC) sono due ossisteroli strutturalmente simili di origini diverse: il primo si forma quasi esclusivamente nel cervello e il secondo si forma in misura minore nel cervello rispetto alla maggior parte degli altri organi.IPOTESI DA VERIFICARE: il danno neuronale e/o la demielinizzazione causano un aumento del flusso di 24OHC dal cervello nel liquido cerebrospinale (CSF), mentre un difetto della barriera emato-encefalica causa un aumento del flusso di 27OHC dalla circolazione nel CSF.Massa di diluizione isotopica la spettrometria è stata utilizzata per analizzare i due ossisteroli nel liquido cerebrospinale e nel plasma di oltre 250 pazienti con diverse malattie neurologiche e geriatriche. I livelli di liquido cerebrospinale dei due ossisteroli erano molto più influenzati dalle diverse malattie rispetto ai livelli plasmatici.I pazienti con malattie demielinizzanti attive avevano un aumento dei livelli di 24OHC nel liquido cerebrospinale con un rapporto 24OHC/27OHC relativamente alto.I pazienti con meningite in generale avevano alti livelli di entrambi gli steroidi con un basso rapporto 24OHC/27OHC.I pazienti con malattia di Alzheimer avevano livelli leggermente aumentati di 24OHC nel liquido cerebrospinale con un minore aumento di 27OHC.I pazienti con sclerosi multipla avevano la tendenza ad avere livelli più alti di 24OHC durante i periodi attivi con un elevato rapporto 24OHC/27OHC. Le misurazioni dei due ossisteroli nel liquido cerebrospinale e nel plasma possono aggiungere significativamente ai metodi biochimici esistenti per la valutazione delle malattie neurologiche.